طراحی کنترل داخلی واکنش زنجیرهای پلیمراز باکتری مایکوپلاسما به روش رقابتی
Authors
Abstract:
چکیده سابقه و هدف: مایکوپلاسماها مهمترین و جدیترین آلودهکنندههای فرآوردههای بیولوژیک تولیدی در کشتهای سلولی میباشند. تکنیک PCR جهت شناسایی سریع جنس مایکوپلاسما، از اولویت بالایی برخوردار است. اما یکی از معایب این روش، نداشتن کنترل داخلی است. هدف اصلی این مطالعه، استاندارد کردن تست PCR تشخیص جنس مایکوپلاسما از طریق ساخت کنترل داخلی به روش رقابتی است. مواد و روشها: با استفاده از پرایمرهای ویژهی هدف 16S rRNA، تست PCR جهت تشخیص مولکولی جنس مایکوپلاسما بهینه شد. پرایمرهای مرکب (Composite Primer) برای کنترل داخلی با استفاده از پرایمرهای ژن کینتوپلاست انگل لیشمانیا طراحی و سپس قطعهی کنترل داخلی تکثیر گردید. هر دو محصول هدف و کنترل داخلی بعد از خالصسازی به پلاسمید PTZ57 R اتصال و سپس در باکتری اشرشیا کلی JM107 ترانسفورم و نهایتاً کلون گردید. یافتهها: اندازهی محصول تشخیصی و کنترل داخلی به ترتیب 272bp و 672bp بود، که از نظر اندازه، اختلاف مطلوبی با هم داشتند. تعداد حداقل کنترل داخلی در هر واکنش، 1000 عدد تعیین شد. حساسیت تست PCR برای تشخیص جنس مایکوپلاسما، 10 باکتری به دست آمد. در تست ویژگی با عوامل مختلف، هیچ محصول ناخواستهای مشاهده نشد. طیفی که در آن تکثیر کنترل داخلی مشاهده شد، بین صد تا ده میلیون باکتری بدست آمد. نتیجهگیری: در کنار سرعت و دقت بالای تکنیک PCR، نتایج منفی و مثبت کاذب که به دلیل وجود مهارکنندههای واکنش PCR رخ میدهند، میتواند کارایی این روش را کاهش دهد. استفاده از یک DNA دیگر به عنوان کنترل داخلی میتواند این خطاها را شناسایی کند.
similar resources
طراحی کنترل داخلی واکنش زنجیره ای پلیمراز باکتری مایکوپلاسما به روش رقابتی
چکیده سابقه و هدف: مایکوپلاسماها مهمترین و جدی ترین آلوده کننده های فرآورده های بیولوژیک تولیدی در کشت های سلولی می باشند. تکنیک pcr جهت شناسایی سریع جنس مایکوپلاسما، از اولویت بالایی برخوردار است. اما یکی از معایب این روش، نداشتن کنترل داخلی است. هدف اصلی این مطالعه، استاندارد کردن تست pcr تشخیص جنس مایکوپلاسما از طریق ساخت کنترل داخلی به روش رقابتی است. مواد و روش ها: با استفاده از پرایمرهای ...
full textطراحی واکنش زنجیرهای پلیمراز برای تشخیص مولکولی سالمونلا تیفی
سابقه و هدف: سالمونلا انتریکا سروتایپ تیفی، باکتری مولد بیماری تب تیفوئید میباشد که سالانه بیش از 16 میلیون نفر در جهان به آن مبتلا میشوند و حدود 600 هزار نفر نیز در اثر آن می میرند. روشهای کلاسیک تشخیص این بیماری اغلب وقتگیر میباشند و از حساسیت کافی برخوردار نیستند. هدف این مطالعه، ارائهی نوعی روش مولکولی واکنش زنجیرهای پلیمراز (PCR: Polymerase Chain Reaction) برای تشخیص سریع و انجام اقدامهای ...
full textطراحی واکنش زنجیرهای پلیمراز برای تشخیص مولکولی سالمونلا تیفی
سابقه و هدف: سالمونلا انتریکا سروتایپ تیفی، باکتری مولد بیماری تب تیفوئید میباشد که سالانه بیش از 16 میلیون نفر در جهان به آن مبتلا میشوند و حدود 600 هزار نفر نیز در اثر آن می میرند. روشهای کلاسیک تشخیص این بیماری اغلب وقتگیر میباشند و از حساسیت کافی برخوردار نیستند. هدف این مطالعه، ارائهی نوعی روش مولکولی واکنش زنجیرهای پلیمراز (pcr: polymerase chain reaction) برای تشخیص سریع و انجام اقدامهای ...
full textجداسازی مایکوپلاسما آگالاکتیه با دو روش کشت و واکنش زنجیرهای پلیمراز(PCR)در گوسفندان مبتلا به بیماری آگالاکسی واگیر درشهرستان بافت
مایکوپلاسما آگالاکتیه بعنوان مهمترین عامل بیماری آگالاکسی واگیردار در بسیاریاز کشورهای مدیترانه و خاورمیانه از جمله در ایران مطرح است. دامهای مبتلامعمولأ دچار عفونت پستان همراه با قطع ناگهانی شیر، تورم مفاصل، التهابملتحمهی چشم، لاغری و ضعف عمومی میشوند که سبب خسارات اقتصادیشدید به دامداران میگردد. هدف از این تحقیق جداسازی و شناسائی مایکوپلاسما آگالاکتیه با استفاده از دو روش کشت وPCR در گوسفندان...
full textمقایسه دو روش واکنش زنجیرهای پلیمراز و کشت استاندارد برای تشخیص سالمونلا در شیر خام
باکتری سالمونلا از جمله باکتریهای بیماریزا است که میتواند در غذا و مواد اولیهحضور پیدا کند. وجود این باکتری در مواد غذایی علاوه بر ایجاد بیماری میتواندباعث افت کیفیت تولید و کاهش رشد اقتصادی کشور شود. در این مطالعه، تعداد 150 مخزن حمل شیر خام برای شناسایی و جداسازی باکتری سالمونلا در شیرخام، برای مقایسه روشهای واکنش زنجیرهای پلیمراز و کشت مورد آزمایش قرارگرفت. در این روش ابتدا شیر خام به روش اس...
full textردیابی انگل نئوسپورا کانینوم در جنینهای سقط شده در گاوداریهای شهرستان اراک به روش واکنش زنجیرهای پلیمراز (PCR)
زمینه مطالعه: : نئوسپورا کانینوم تک یاخته انگلی بیماریزاست که به عنوان یکی از عوامل مهم ایجاد کننده سقط جنین عفونی گاو در سراسر جهان مطرح می باشد. هدف: هدف از این مطالعه بررسی و ردیابی حضور انگل نئوسپورا کانینوم در مغز، مخچه و بصل النخاع جنین های سقط شده در گاوداری های شهرستان اراک به روش ملکولی می باشد. روش کار: تعداد 38 نمونه مغز، مخچه و بصل النخاع جنین های سقط شده با روش ملکولی از نظر وجو...
full textMy Resources
Journal title
volume 20 issue 2
pages 104- 111
publication date 2015-06
By following a journal you will be notified via email when a new issue of this journal is published.
No Keywords
Hosted on Doprax cloud platform doprax.com
copyright © 2015-2023